2.3 CCK-8法检测细胞增殖 收集细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，3×103个细胞/孔，每孔100 μL，置37 ℃、5%CO2培养箱中培养过夜，使细胞贴壁。按照不同分组处理细胞，继续培养48 h。取出细胞培养板，向每孔加入10 μL CCK8溶液，继续培养4 h。在酶联免疫检测仪450 nm处测量各孔的吸光值。同时设置调零孔(培养基、CCK8)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解递质、培养基、CCK8)，每组设定3复孔。计算各组细胞的相对增殖率。

    2.4 Western blot检测各组细胞Smad7、SnoN蛋白的表达水平 将需要抽提的蛋白的细胞从培养箱中取出，吸去培液，适量预冷的1×PBS洗涤2次，吸去PBS，低温高速离心，提取上清总蛋白。BCA蛋白定量试剂盒测定细胞蛋白浓度。取等量的总蛋白行SDS-PAGE凝胶电泳，并转至PVDF膜上。5%脱脂奶粉室温封闭4 ℃过夜，分别加入1∶1 000稀释的兔抗Smad7抗体、兔抗SnoN抗体;孵育一抗的膜用PBST洗涤3次，按照1∶10 000稀释HRP标记的二抗，与膜室温孵育1 h。将膜放置在暗室中，根据用量取ECL发光液A和B等量混匀，加在膜的正面与之充分接触。然后将膜置于全自动化学发光分析仪中检测 ......