UVB诱导人皮肤成纤维细胞中beta-catenin基因的变化研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件(1902KB，4页)。
1.2.4 RT-PCR检测衰老人成纤维细胞中β-catenin、c-myc mRNA表达变化:取2～8代人成纤维细胞按1×106个每皿接种于直径100mm培养皿中,接种后24h细胞长至80%融合,在40mJ/cm2UVB紫外线下照射,于照射后第0、12、24、48、72h采用Trizol法提取细胞总RNA根据Genbank中β-catenin、c-myc和GAPDH的cDNA序列设计如下引物(上海生工公司合成)。Β-catenin(120bp)引物:5'-TGG ACT CTG GAA TCC ATT CTG-3'(F), 5'-AAA ATC CCT GTT CCC ACT CA-3'(R), c-myc(313bp)引物:5'-TGG ACT CTG GAA TCC ATT CTG-3'(F), 5'-AAA ATC CCT GTT CCC ACT CA-3'(R),GAPDH(289bp)引物:5'-TGG ACT CTG GAA TCC ATT CTG-3'(F), 5'-AAA ATC CCT GTT CCC ACT CA-3'(R)。以GAPDH为内参,图像分析仪扫描成像,ImageQuant软件半定量分析。
2实验结果
2.1 人皮肤成纤维细胞的分离与培养:采用组织块法培养第4天开始有细胞从组织块边缘爬出,第10～14天细胞长至融合,长梭形细胞中间可见铺路石样细胞表皮细胞,将融合细胞按1:3进行传代,传代后细胞生长加速第2天可融合,从第2代开始细胞呈典型的长梭形,铺路石样表皮细胞消失。
2.2 UVB诱导成纤维细胞衰老及β-gal半乳糖苷酶细胞衰老染色:UVB20～40mJ/cm2能量照射后可见细胞生长停滞呈典型衰老形态,细胞形态上变得宽大扁平,胞浆透明,胞核内颗粒增多, (图1①～②)。β-gal半乳糖苷酶细胞衰老染色可见典型衰老细胞核周染成蓝色,对照组细胞阳性率为(18.23±3.24)%,诱导衰老组阳性率为(88.75±5.32)%,差异具有统计学意义(P<0 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1902KB，4页)。