2.5 流式细胞术检测细胞早期凋亡

    将“2.2”项下各组细胞置于37 ℃、含5%CO2的培养箱中培养24 h后，将细胞置于1.5 mL离心管中，在室温下以100×g离心5 min，弃上清，加入1 mL PBS重悬，再在室温下以100×g离心5 min，PBS反复洗涤3次，按细胞凋亡检测试剂盒说明书操作，经流式细胞仪检测，设定(Annexin Ⅴ-FITC)+/PI-象限为早期凋亡区，计算各组细胞早期凋亡细胞的比例，记为早期凋亡率。试验重复3次。

    2.6 Hoechst 33342和PI双染法检测细胞坏死

    将“2.2”项下各组细胞置于37 ℃、含5%CO2的培养箱中培养24 h后，将细胞置于1.5 mL离心管中，在室温下以100×g离心5 min，弃上清，加入800 μL细胞染色缓冲液，按照细胞凋亡与坏死检测试剂盒说明书操作，经荧光显微镜观察，设定弱蓝色荧光细胞为正常细胞，强红色荧光细胞为坏死细胞，计算各组细胞坏死率。试验重复3次。

    2.7 Western blot法检测细胞中Caspase 3、Cleaved- Caspase 3蛋白表达

    将细胞置于37 ℃、含5%CO2的培养箱中培养24 h后，用PBS冲洗细胞2～3次，转移至1.5 mL离心管中 ......